Правила визначення групи крові за системою АВО

Процедура визначення груп крові за системою АВО полягає у виявленні антигенів А і В в еритроцитах за допомогою стандартних антитіл і використанням агглютинінів у плазмі або сироватці аналізованої крові стандартними еритроцитами. Методика розроблена на початку XX століття і досі активно застосовується в медицині. Визначення антигенів А і В здійснюється завдяки цоліклонам анти-А і анти-В.

Основні поняття

У донорів завжди визначаються не тільки антигени в еритроцитах, а й агглютиніни в сироватці (плазмі) із застосуванням стандартних еритроцитів. Як біоматеріал використовується венозна кров. Перед дослідженням необхідно відмовитися від жирної їжі за добу до аналізу і не курити за півгодини до складання тесту. Групи крові визначають двічі: спочатку в лікувальному відділенні, де заготовляється матеріал, а потім підтверджують дослідженням в лабораторії.

Визначення груп крові за системою АВО є основним тестом, який використовується в трансфузіології. Також подібна система груп крові є у деяких тварин, наприклад у шимпанзе, горил і бонобо.

Історія відкриття

У науці існує загальноприйнята думка про те, що методика визначення груп крові за системою АВО була виявлена вперше Карлом Ландштейнером, австрійським вченим, у 1900 році. Тоді він описав у своїй праці три типи антигенів. За це через тридцять років йому була присуджена Нобелівська премія з медицини та фізіології. Через те, що між вченими раніше не було тісних зв 'язків, пізніше встановили, що чеський лікар-серолог Ян Янський незалежно від вишукувань К. Ландштейнера вперше описав чотири групи крові людини, але його дослідження були не відомі широкій аудиторії. В даний час саме класифікація, розроблена Я.Янським, застосовується в Росії і республіках колишнього СРСР. У США У.Л. Мосс створив свою схожу роботу в 1910 р.

Методика визначення груп крові за системою АВО за допомогою цоліклонів

Група крові повинна визначатися в приміщенні з хорошим освітленням з дотриманням діапазону температури від 15 до 25 градусів Цельсія, оскільки відхилення від цієї норми можуть вплинути на результати дослідження. На платівці або тарілці пишуться ініціали та прізвище пацієнта. Зліва направо або по колу наносять стандартні позначення груп (O (I), A (II), B (III)). Під ними розміщують по краплі відповідні сироватки окремими піпетками для кожного виду. Потім до них додається кров пацієнта. Матеріал для дослідження береться з мочки вуха або пальця. Цього вимагає техніка визначення групи крові за системою АВО.

Правомірно також використання еритроцитів, що знаходяться в пробірці після того, як утворився згусток. Потрібно, щоб кількість сироватки була більшою за кількість доданої крові вдесятеро. Після цього краплі перемішуються скляними паличками (окремо для кожної). Протягом п 'яти хвилин, акуратно погойдуючи платівку, дивляться за появою реакції гемагглютинації. Вона виявляється в тому, що з 'являються маленькі червоні грудочки, що зливаються потім у більш великі. Сироватка в цей час практично повністю втрачає колір.

Щоб усунути помилкову гемагглютинацію простого склеювання еритроцитів, потрібно через три хвилини додати одну краплю фізіологічного розчину і перевірити, чи зберігається агглютинація. Якщо так, то вона є справжньою. Все, визначення груп крові за системою АВО на цьому завершено.

Тлумачення результатів

В результаті можуть спостерігатися чотири реакції:

• не відбувається агглютинація з жодною з сироваток - перша група O (I);
• реакція проявилася з сироватками I (ab) і III (a) - друга група A (II);
• агглютинація настає з сироватками I (ab) і II (b) - третя група B (III);
• якщо реакція відбувається з трьома сироватками, потрібно провести додаткову процедуру з реактивами групи AB (IV), які є стандартними; якщо агглютинація в такій краплі відсутня, можна вважати, що це 4-а група крові AB (IV).

Експрес-метод для резус-фактора

Методика визначення груп крові за системою АВО передбачає одночасне виявлення резус-фактора (Rh).

Поверхню платівки попередньо змочують і пишуть на ній "контрольна сироватка" і "сироватка антирезус". Потім під написами мають одну-дві краплі потрібних реактивів і додають до них аналізований матеріал. Для цього також можна використовувати кров з пальця (в такій же кількості, як і об 'єм сироватки) або еритроцити, що залишилися на дні пробірки після появи згустку (половина обсягу сироватки). Вибір матеріалу на кінцевий результат не впливає. Потім кров і сироватка перемішуються сухою скляною паличкою, після чого протягом п 'яти хвилин очікують настання реакції. Для того щоб усунути неправдиві свідчення, через три-чотири хвилини додають ізотонічний розчин натрію хлориду (всього кілька крапель). Визначення групи крові за системою АВО і Rh проводиться дуже часто.

Якщо агглютинація еритроцитів у краплині з сироваткою відбувається, це вказує на позитивний резус крові. За статистикою Rh + зустрічається у 85% населення планети. Відсутність її дозволяє говорити про резус-негативну приналежність. Якщо агглютинація з 'явилася в контрольній сироватці, значить вона прийшла в непридатність. На жаль, алгоритм визначення групи крові за системою АВО не завжди спрацьовує ідеально.

Які помилки можуть бути допущені при даній методиці?

Неточності при визначенні приналежності крові тій чи іншій групі залежать від таких причин:

• Технічних.
• Біологічна специфіка досліджуваної крові.
• Неповноцінного характеру стандартних сироваток і еритроцитів.

Технічні помилки

Можливі похибки при визначенні групи крові системи АВО перехресним способом:

• Неправильно розташовані на платівці сироватки.
• Некоректні кількісні пропорції матеріалу.
• Використання недостатньо чистих тарілок або платівок, які стикаються з кров 'ю (кожна сироватка повинна набиратися окремою піпеткою, промивати яку потрібно розчином хлориду натрію (в концентрації 0,9%)).
• Некоректний запис аналізованого матеріалу.
• Недотримання часу, необхідного для настання агглютинації, - поспішати і враховувати реакцію до закінчення п 'яти хвилин не слід, тому що в крові можуть бути слабкі агглютиногени. Перетримувати також не варто, тому що краплі можуть підсохнути з країв і призвести до помилкового ув 'язнення. Важливо дотримуватися правил визначення групи крові за системою АВО.
• Помилкове центрифугування також може призвести до помилкового результату.
• Температура повітря, що перевищує допустиму, впливає на відсутність агглютинації. Щоб уникнути помилок подібного роду, потрібно використовувати спеціальну сироватку, призначену для роботи в спекотному кліматі. Визначати групи крові потрібно на тарілці або платівці, зовнішня поверхня яких опускається в холодну воду.

Помилки біологічної специфіки

Похибки, пов 'язані з біологічною специфікою аналізованої крові, діляться на два типи.

• Залежні від особливостей еритроцитів.
• Помилки, обумовлені біологічними особливостями сироватки.

Розгляньмо кожен вигляд більш детально.

Залежні від особливостей еритроцитів

• _{Пізня агглютинація, що пояснюється "слабкими" формами еритроцитів і антигенів. Для того щоб уникнути помилок, визначати групу крові донорів і реципієнтів потрібно з використанням стандартних еритроцитів. Індентифікувати агглютиноген А2 слід повторним дослідженням з іншими видами реагентів та іншого посуду, збільшивши час реєстрації реакції.}
• "Панагглютинація" ("аутоагглютинація") - вміння крові виявляти однакову реакцію неспецифічного характеру з усіма сироватками, в тому числі з власною. Через п 'ять хвилин гострота такої агглютинації слабшає, хоча повинна посилюватися. Подібні випадки спостерігаються у онкохворих, обпалених та ін. Як контроль необхідно оцінити прояв агглютинації аналізованих еритроцитів у стандартній сироватці четвертої групи і фізрозчині. При "панагглютинації" групу крові визначають в результаті потрійного відмивання еритроцитів. Якщо воно не дає потрібного результату, варто зробити повторний забір зразка крові в зігріту перед процедурою пробірку і поставити пробу в термоконтейнер, щоб сприяти підтримці температури 37 градусів Цельсія і вище. Потім слід доставити в лабораторію, де зберігається зазначена вище температура і використовуються підігріті фізіологічний розчин, платівка і реактиви.
• Іноді еритроцити аналізованої крові розташовуються як "монетні стовпчики", і їх можна прийняти за агглютинати. Якщо додати дві краплі ізотонічного розчину і м 'яко похитати планшет, червоні кров' яні клітини займають правильну позицію.
• Неповна або змішана агглютинація, що зустрічається у пацієнтів з другою, третьою і четвертою групами в результаті трансплантації кісткового мозку або в перші три місяці після переливання крові 0 (I).

Обумовлені біологічними особливостями сироватки

• Під час рутинного тестування в результаті попередньої сенсибілізації виявляються антитіла іншої специфічності. Потрібно визначити її і підібрати еритроцити без вмісту антигену, до якого виявлена імунізація. Реципієнту потрібно обов 'язково підбирати сумісну донорську кров індивідуально.
• Відсутні антитіла А і В, що спостерігається у новонароджених і хворих, які страждають від гноблення гуморального імунітету.
• При утворенні "монетних стовпчиків" аномальний результат потрібно підтвердити, взявши стандартні еритроцити першої групи. Розчин хлориду натрію і погойдування планшета допомагають диференціювати справжні агглютинати і "монетні стовпчики".

Помилки, пов 'язані із застосуванням неповноцінних стандартних еритроцитів і сироваток

Слабкі сироватки з минулим терміном придатності або такі, що мають титр менше 1:32 здатні зароджувати слабку і пізню агглютинацію. Застосування таких реактивів неприпустиме.

Використання непридатних стандартних еритроцитів або сироваток, приготованих в нестерильних умовах і законсервованих в недостатній мірі, призводить до появи "бактеріальної" агглютинації, що має неспецифічну природу.

Існує безліч популярних припущень про групи крові системи АВО, що з 'явилися безпосередньо після її виявлення в різних світових культурах. Так, наприклад, у 30-ті роки минулого століття в Японії та деяких інших країнах отримала популярність теорія, що пов 'язує групу крові з тим чи іншим типом особистості. Подібні теорії популярні і на сьогоднішній день.

Є також думка, що людина, що має групу А, схильна до важкого похмілля, О пов 'язана з хорошими зубами, а група А2 - з найвищим рівнем IQ. Але науково такі твердження не доведені.

Ми розглянули визначення груп крові за системою АВО за допомогою стандартних сироваток.