Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

Що означає імунохроматографічний аналіз (ІХА)? Розберемося детальніше в цьому питанні.

ІХА - імунохімічний спосіб аналізу, який заснований на методі тонкошарової хроматографії. Він включає реакцію між відповідним антитілом і антигеном в біологічних матеріалах. Здійснюється за допомогою особливих тест-смужок, тест-касет або панелей. ІХА - це експрес-тест.


Сутність цього методу дослідження

Дія його ґрунтується на тому, що при зануренні в біологічну рідину (або інший рідкий зразок) тесту вона починає рухатися вздовж смужки за методом тонкошарової хроматографії. Рухаються разом з нею нанесені на неї специфічні мічені антитіла, які зв 'язуються аффінно з аналізованим компонентом.

Розрізняються два формати аналізу: прямий і конкурентний метод.

Прямий метод

У форматі сендвічного (прямого) імунохроматографічного аналізу крові використовується кон 'югат антитіла-мітки, який наноситься для кон' югату на мембрану. Іммобілізовані антитіла на смужці, що володіють конкретним аналітом, на контрольній лінії - антитіла антивідові, специфічні до антитіл первинних.

При внесенні зразка, в якому міститься кон 'югат (шукана речовина), на мембрану, зв' язується шуканий компонент з кон 'югатом Ат-мітки. Після цього сформований імунний комплекс проникає в тестову зону, де відбувається зв 'язок зі специфічними антитілами, і утворюється "сендвіч" Ат- Аг-Ат-мітка. Потім надмірна кількість кон 'югата, що не зв' язався, з 'єднується на контрольній лінії з антивідовими антитілами. Якщо на тест-смужці з 'являються дві лінії, то результат тесту позитивний. Якщо аналіз відсутній у зразку, то зв 'язується кон' югат з антивідовими антитілами лише на контрольній лінії, і утворюється одна лінія.

Прямий ІХА застосовується для визначення збудників інфекційних патологій, вірусів - високомолекулярних сполук, включаючи різні гормони, ВІЛ.

Конкурентний метод дослідження

Спосіб конкурентного імунохроматографічного аналізу застосовується для встановлення низькомолекулярних сполук. Заснований він на конкуренції іммобілізованого кон 'югату аналіт і аналіту: носій-білок за обмежену кількість центрів зв 'язування периферичних антитіл, які містяться в кон' югаті Ат-мітка. Коли наноситься зразок, що містить аналіт, то останній зв 'язується на мембрані з кон' югатом з кон 'югатом Ат-мітка. Імунокомплекс надалі проходить через тестову зону, в якій іммобілізується кон 'югат аналіт, тобто білок-носій.


З цим кон 'югатом не може зв' язатися імунокомплекс через стеричні складнощі: низькомолекулярні сполуки найчастіше володіють однією антигенною детермінантою, таким чином, у імуноглобулінів є один центр зв 'язку з антигеном, який вже зайнятий до цього аналітом. Імунний комплекс згодом зв 'язується антивідовими імуноглобулінами, які знаходяться на контрольній лінії. Якщо в тестовій області відсутня пофарбована смуга і є фарбування в контрольній зоні, це говорить про те, що зміст визначеного компонента в досліджуваному зразку вище порогового значення для такого тесту. Якщо в аналізі відсутня аналізована речовина в зразку, то відбувається зв 'язок кон' югату Ат-мітка з кон 'югатом Аг: носій-білок, іммобілізований в області тестової лінії. Ат-мітка вільний кон 'югат потрапляє в сферу контрольної лінії, де зв' язується з антивідовими антитілами. Якщо є дві пофарбовані лінії (контрольна і тестова), то можна говорити про негативний результат тесту.

Метод конкурентного ІХА застосовується для визначення низькомолекулярних сполук, включаючи тканинні екстракти.

Перевага такого способу - легкість і швидкість використання, можливість застосування неприбірних методів ІХА з оцінкою результату візуально. Не потрібно додаткове обладнання, і аналіз може провести людина без медичної освіти в будь-який час.

Які застосовуються мітки в ІХА?

В імунохроматографічному аналізі як мітки застосовуються різні частинки і речовини.

  • Барвники (частинки фарбованого латексу, або наночастинки вуглецю, або колоїдного золота). Такий варіант дозволяє візуально відстежувати результат або визначити колориметричним приладом. Застосування червоних міток, які приєднуються до носія, дозволяє робити мультианаліз, де різнокольорові лінії відповідають різним аналітикам. Використовуваною міткою найчастіше виступають наночастинки золота колоїдного.
  • Пов 'язані ковалентно з латексними частинками біолюмінесцентні, фосфоресцентні та флуоресцентні мітки. Застосовуються лише в приладових способах ІХА, в яких реєструється результат особливим рідером. Найбільш поширеними є флуоресцентні мітки.
  • Парамагнітні мітки, закріплені на латексних частинках. Метод застосовується в ІХА з використанням приладів, які реєструють силу магнітного поля.
  • Ліпосоми, які використовуються як носії різних міток (електроактивних, ферментативних, флуоресцентних, фарбуючих тощо) Це новий напрямок серед різновидів аналізу.
  • Ферментні мітки, що застосовуються за принципом ІФА. Реєстрація реакції проводиться за допомогою фарбування субстратів. У підсумку виходить візуальний результат, або вважається рідером.

Переваги даного методу дослідження

Головними перевагами застосування методу імунохроматографічного аналізу стають:

  • Зручність і простота - дозволяє отримати результат (первинне уявлення та аналіз причини хвороби) без спеціальних навичок та обладнання.
  • Надійність - достовірність тестів сягає 99,8%, кожен тест при цьому має внутрішній вбудований контроль.
  • Анонімність - це особливо важливо при визначенні хвороб, що передаються статевим шляхом, інших інфекційних хвороб, а також встановленні вживання наркотичних речовин.
  • Економічність - придбати тест може кожен, економиться час на проведення аналізу.
  • Незалежність - не потребує попередньої консультації та рецепту лікаря.

Тест на наркотики як проводиться: особливості та недоліки ІХА-методу

Найпопулярнішою послугою стає аналіз сечі на наркотики за допомогою методу імунохроматографічного аналізу. Це дозволяє досліджувати сечу на 14 видів наркоречовин.

Імунохроматографічний аналіз на наркотики також вважається експрес-методом діагностики. Результат тесту можна дізнатися через 15 хвилин. Для проведення даного дослідження використовують особливі тест-смужки, які просякнуті речовинами-індикаторами. Якщо в сечі є сліди наркотичної речовини, колір смужки змінюється. Основний недолік такого аналізу - неможливість визначити, яка концентрація речовини і ступінь наркотичного сп 'яніння, таким чином, результати імунохроматографічного аналізу як доказ у суді використовувати не вийде.


Який результат такого аналізу?

Якщо на індикаторах з 'явилися дві рожеві смуги, то робиться висновок, що в сечі не міститься наркотик, або ж його концентрація недостатня для визначення імунохроматографічним методом. При виникненні однієї рожевої смуги можна говорити про наявність наркотичної речовини: марихуани, похідних ефедрона, опіатів, похідних барбітурової кислоти, амфетамінів, кокаїну, фенциклідину, бензодіазепінів, екстазі.

Які можна зробити висновки?

Імунохроматографічний аналіз (експрес-тест) є ефективним засобом діагностики, він дозволяє візуально протягом декількох хвилин виявити і оцінити концентрацію антигенів, гормонів, антитіл та інших діагностично важливих компонентів у людському організмі. Експрес-тести мають високу ступінь точності і чутливості, виявляється більше ста видів хвороб, а також весь спектр наркотичних речовин, і достовірність аналізу дуже висока.